Вплив дієти n-6: n-3 співвідношення поліненасичених жирних кислот за якістю м’яса, характеристиками туші, профілями жирних кислот тканини та експресією ліпогенних генів у коз, що ростуть

Ролі Концептуалізація, придбання фінансування, методологія, написання - огляд та редагування

Відділ ветеринарних доклінічних наук факультету ветеринарної медицини, Університет Путра Малайзії, Серданг, Малайзія, Департамент рослинництва та біотехнологій, Факультет наук про життя та біотехнології, Університет Шахіда Бехешті, Тегеран, Іран

Афілійований відділ ветеринарних доклінічних наук, факультет ветеринарної медицини, Університет Путра Малайзія, Серданг, Малайзія

Написання ролей - оригінальний проект

Відділ ветеринарних доклінічних наук, факультет ветеринарної медицини, Університет Путра Малайзія, Серданг, Малайзія, департамент птахівництва, сільськогосподарський факультет, Університет Тарбіат Модарес, Тегеран, Іран

Ролі Формальний аналіз

Афілійований інститут тропічного землеробства, Університет Путра, Малайзія, Серданг, Малайзія

Ролі Курація даних, Розслідування

Афілійований інститут тропічного землеробства, Університет Путра, Малайзія, Серданг, Малайзія

Ролі програмного забезпечення, перевірка

Афілійований відділ наук про тварин, сільськогосподарський факультет, Університет Путра, Малайзія, Серданг, Малайзія

Ролі Придбання фінансування, нагляд

Написання ролей - огляд та редагування

Поточна адреса: Інститут фізіології та гігієни наук тварин, Бонський університет Каценбургвег 7–9, Бонн, Німеччина

Афілійований відділ сільського господарства, харчової та харчової науки, Університет Альберти, Едмонтон, Канада

Махді Ебрахімі,
Мохамед Алі Раджіон,
Саїд Джафарі,
Мохаммад Фаселех Джахромі,
Ехсан Оскуей,
Авіс Курні Сазілі,
Йонг Мен Го,
Мортеза Хоссейні Гафарі

Виправлення

12 вересня 2019 р.: Ебрагімі М, Раджіон М.А., Джафарі С, Фаселе Яхромі М, Оскуей Е. та ін. (2019) Виправлення: Вплив дієти n-6: n-3 співвідношення поліненасичених жирних кислот за якістю м’яса, характеристиками туші, профілями жирних кислот тканини та експресією ліпогенних генів у коз, що ростуть. PLOS ONE 14 (9): e0222678. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0222678 Виправлення перегляду

Цифри

Анотація

Добробут тварин

Це дослідження було проведено в Університеті Путра Малайзії відповідно до керівних принципів дослідницької політики Університету Путра Малайзії з питань добробуту та етики тварин. Експериментальний протокол був затверджений Комітетом з використання та догляду за тваринами в університеті Малайзії. Догляд за експериментальними козами відповідав малазійським стандартам.

Тварини, дієти та управління

Процедури забою та вимірювання характеристик туші

Наприкінці 100-денного випробування всіх тварин забивали шляхом перерізування горла відповідно до стандартних процедур забою, викладених у MS 1500: 2004 (Департамент стандартів Малайзії) в лабораторії М'ясознавства, Департамент наук про тварин, факультет Сільське господарство, Університет Путра, Малайзія. З туші було вилучено приблизно 150 г м'яза ЛД від 12-го до 15-го ребра. Усі зразки зберігали при -80 ° C до аналізу на довгий ланцюг FA, якість м’яса та антиоксидантну активність. Через 24 год зафіксували охолоджену масу туші, а потім тушки розкололи на рівні половини вздовж середньої лінії за допомогою каркасної пилки. Праву половину негайно розтинали для відбору проб м’язів. Права половина туші була ребристою між 12-м і 13-м ребрами. Відповідну товщину заднього жиру визначали за цим розрізом за допомогою алюмінієвої лінійки. Площу очей ребра визначали за допомогою програмного пакету Image J (Національний інститут охорони здоров’я, Бетесда, штат Меріленд, США).

Методика дисекції, що використовується для вимірювання складу м’язів, кісток та жиру, була описана Colomer-Rocher та співавт. [18]. Праву частину кожної туші зважували, а потім ділили на п’ять основних порізів, а саме шию, плече, груди, поперек і ногу, а зрізи зважували і виражали у відсотках від загальної ваги туші. Кожен зріз розтинали на компоненти м’яса, кістки, підшкірного жиру та міжм’язового жиру. По-перше, м’яз окремо видаляли з їх кріплення, а потім видаляли зовнішній жир. М’язи, жир та кістки відокремлювали та зважували індивідуально.

Визначення якості м’яса

РН зразків м'яса вимірювали через 1, 3 і 6 днів після смерті, вводячи рН-електрод, підключений до портативного рН-метра (Hanna Instruments, Woonsocket, RI, США), встановленого для запису при 5 ° C.

Інструментальний колір вимірювали за допомогою системи ColorFlex (лабораторія Hunter Associates, Рестон, США). Зразки оцінювали на легкість (L *), почервоніння (a *), жовтизну (b *), кут відтінку (арктан, b */a *), що описує відтінок або колір м’яса та індекс насиченості або насиченість як √ (a 2 + b 2), що описує яскравість або яскравість кольору [19]. Всі значення визначали із середнього значення семи вимірювань кожного м’яза при 28 ± 2 ° C із використанням стандартного спостерігача 10˚. Перед використанням спектроколориметр стандартизували за допомогою білої (L * = 100) та чорної (L * = 0) стандартних плиток. Зразкам давали розморозитися при 4 ° С протягом ночі перед аналізом. Зразки поміщали безпосередньо в кольоромір і вимірювали. Три показники значень L *, a * і b * та спектральної відбивної здатності (400–700 нм) були зібрані з різних ділянок кожного зразка та усереднені.

Для визначення втрати крапель зразки приблизно 30 г, відібрані через 24 год, 3 дні та 6 днів після забою, обрізали та зважили. Потім кожен зразок поміщали у квадратну сітку (25 см 2) і підвішували у надутому поліетиленовому пакеті на 48 год при 4 ° C, не контактуючи з мішком, після чого їх повторно зважували [19]. Втрата крапель розраховувалася як відсоток зміни ваги [19]. Де; W1 - початкова вага, W2 - маса необробленої проби.

Для визначення втрат при варінні зразки м'яса поміщали в поліетиленові пакети і вставляли у ванну з гарячою водою (80 ° C) до досягнення внутрішньої температури (виміряної за допомогою термометра з ручним зондом; Hanna Instruments, Woonsocket, RI, USA) 78 ° C. Потім зразки козячого м’яса в мішках охолоджували під водопровідною водою протягом 15 хв. Охолоджені зразки відбирали з поліетиленового пакета, витирали насухо паперовими рушниками і зважували. Втрати при варінні оцінювали шляхом зважування їх до і після варіння [19]. Де; W2 - маса вихідної проби, а W3 - кінцева вага.

Вимірювання сили зсуву Уорнера – Брацлера (WBS) проводили на трьох стрижнях (діаметром 1,27 см), вилучених з м’яса LD паралельно поздовжній орієнтації м’язових волокон. WBS визначали за допомогою A. HD плюс аналізатор текстури (Stable Micro System, Surrey, UK), оснащений приладом леза Warner Bratzler. Кожну серцевину розміщували на базовій пластині аналізатора текстури і один раз стригли в центрі та перпендикулярно поздовжньому напрямку волокон. Значення сили зсуву Warner-Bratzler були представлені як середнє значення всіх основних значень кожної окремої вибірки. Нижче значення сили зсуву (Ньютон, N) вказує на більш ніжне м’ясо, тоді як більш високі сили зсуву вказують на більш жорстке м’ясо.

Окислення ліпідів у зразках м’яса вимірювали за допомогою речовин, реагуючих на тіобарбітурову кислоту (TBARS), за методом Лінча та Фрея [20], модифікованим Mercier та співавт. [21]. Зразки м'яса (1 г) гомогенізували в 4 мл 0,15 М KCl + 0,1 мМ BHT за допомогою ультратураксу (1 хв, середня швидкість). Після гомогенізації 200 мкл зразка змішували з розчином TBRAS, а потім нагрівали на водяній бані при 95 ° C протягом 60 хв до розвитку рожевого кольору. Після охолодження до екстрактів додавали 1 мл дистильованої води та 3 мл н-бутилового спирту і перемішували на вортексі. Суміші центрифугували при 5000 (об/хв) протягом 10 хв. Поглинання надосадової рідини зчитували на відповідній заготовці при 532 нм за допомогою спектрофотометра (Secomam, Domont, Франція). TBARS були розраховані за стандартною кривою 1, 1, 3, 3-тетраетоксипропану і виражені у вигляді зразка малонового диальдегіду (MDA)/кг.

Аналіз жирних кислот експериментальної дієти та тканини longissimus dorsi

Кількісне визначення тканинних PPAR і експресії генів SCD методом полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі (ПЛР)

Відразу після забою м'яз LD швидко вирізали та швидко заморозили у рідкому азоті та зберігали при -80 ° C до вилучення РНК. Загальну РНК витягували із 100 мг замороженої тканини за допомогою міні-набору тканин RNeasy®lipid (Кат. № 74804, Qiagen, Hilden, Німеччина), а розщеплення ДНКази завершували під час очищення РНК з використанням набору без ДНК-азотної ДНКази (Qiagen, Hilden, Німеччина) відповідно до інструкцій виробника. Загальну чистоту РНК визначали за співвідношенням коефіцієнтів поглинання 260/280 нм, використовуючи спектрофотометр NanoDrop ND-1000 UV-Vis (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA). Очищену загальну РНК (1 мкг) транскрибували за допомогою зворотної транскрипції Quantitect ® (Qiagen, Hilden, Німеччина) згідно з рекомендацією виробника.

ПЛР у режимі реального часу проводили за допомогою Bio-Rad CFX96 Touch (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Каліфорнія, США), використовуючи оптичні пластини з використанням зеленого набору для ПЛР Quantifast ® SYBR (Кат. No 204054, Qiagen, Hilden, Німеччина). Послідовності праймерів наведені в таблиці 3. У цьому дослідженні використовували β-актин [23], PPARα, PPARγ та SCD [24].

Β-актин використовували як еталонний ген для нормалізації досліджуваних генів. Всі праймери були придбані через 1-й BASE-синтез олігонуклеотидів (1-а база, Сінгапур). Кожна реакція (20 мкл) містила 8,5 мкл зеленої ПЛР-суміші SYBR, 1 мкл кДНК, по 1 мкл кожного прямого та зворотного праймерів та 8,5 мкл води без РНКази. Цільові гени ампліфікували за допомогою наступної програми циклічного циклу: 95 ° C протягом 10´, 40 циклів ПЛР при 95 ° C для 30˝, 60 ° C для 20˝ і 72 ° C для 20˝. Флуоресценцію вимірювали через кожні 15˝ для побудови кривої плавлення.

Статистичний аналіз

Якість м’яса

Колір м’яса у віці (1, 3 та 6 днів) м’яза ЛД представлений у таблиці 5. Різні рівні харчових співвідношень n-6: n-3 PUFA у післязабійному періоді впливали на L * (легкість ), значення * (почервоніння), значення b * (жовтизна), кольоровість та кут відтінку м'яза LD. Колір м'язів LD був світлішим (вище значення L *; P 0,05), значення a * і b * в ті самі дні післязабійного періоду. Група LR достовірно знизила L * у м’язах LD через 1 добу та зі збільшенням періоду після забою порівняно з групою HR. Значення кольоровості або насиченості суттєво (Р 0,05) після забою або дієтичного лікування для всіх груп лікування.

РН зразків м’яса (табл. 6) на 1, 3 та 6 дні після забою був однаковим для всіх груп (Р> 0,05). Відсоток втрати крапельниці в м’язі ЛД у різні післязабійні періоди був суттєво різним (Р 0,05) нижчим у порівнянні з іншими методами лікування у різні післязабійні періоди. Період старіння суттєво (P Рис. 1. Вплив харчових співвідношень n-6: n-3 PUFA на окислення ліпідів longissimus dorsi у кіз.

LR: низьке співвідношення n-6: n-3 PUFA (2,27: 1); MR: середнє співвідношення n-6: n-3 PUFA (5,01: 1); HR: високе співвідношення PUFA n-6: n-3 (10,38: 1). Вертикальні смуги є стандартною помилкою. x та y позначають значну різницю протягом доби після забою; a, b і c позначають суттєву різницю між днями після смерті.

Вплив дієтичних співвідношень n-6: n-3 PUFA на вміст FA в експериментальних дієтах та тканині longissimus dorsi

Експресія генів PPARα, PPARγ та SCD у м’язі спинного лонгсимуса

На рис. 2, 3 і 4 наведено відносну експресію генів у м’язі LD коз, які харчуються різними харчовими співвідношеннями n-6: n-3 PUFA. Ген PPARα продемонстрував більш високий рівень експресії в групі LR порівняно з групою HR (P Рис. 2. Експресія PPARα в м'язі LD груп лікування, порівняно з групою HR.

Значення нормалізували за допомогою гена ведення домашнього господарства, β-актину. Потім оброблені зразки експресували щодо експресії генів групи HR. Значення - це середнє значення ± 1 стандартний бар помилок. Значення, позначені *, показують суттєву різницю порівняно з групою HR (P Рис. 3. Експресія PPARγ у LD-м'язах груп лікування, порівняно з групою HR.

Значення нормалізували за допомогою гена ведення домашнього господарства, β-актину. Потім оброблені зразки експресували щодо експресії генів групи HR. Значення - це середнє значення ± 1 стандартний бар помилок. Значення, позначені *, демонструють суттєву різницю порівняно з групою ЧСС (P Рис. 4. Вираження ССД у м'язах ЛД груп лікування у порівнянні з групою ЧСС.