Постнатальні ін’єкції окситоцину спричиняють стійке збільшення ваги та підвищення ноцицептивних порогів у самців та самок щурів

Анотація

Постнатальна затримка росту пов'язана із збільшенням захворюваності та смертності в період дитинства, а також із підвищеним ризиком розвитку таких захворювань, як серцево-судинні та інсулінонезалежний цукровий діабет, у подальшому житті (1). Затримка внутрішньоутробного розвитку та передчасні пологи - це умови, часто пов’язані з поганим післяпологовим ростом.

У новонароджених щурів показано, що обробка викликає тривале збільшення приросту ваги та ноцицептивних порогів (2, 3), а також регулює центральні глюкокортикоїдні рецептори, впливаючи тим самим на активність осі гіпоталамус-гіпофіз-наднирники (4) . Крім того, масаж, який проводять дітям, може знизити рівень кортизолу в сечі та норадреналіну (5). Протягом останніх років було показано, що поводження з недоношеними дітьми за допомогою кенгуру (6) або масажу (7, 8) має позитивні фізіологічні, метаболічні та поведінкові ефекти, а також покращує постнатальний ріст (6–11). Механізм цих ефектів в основному невідомий, але, ймовірно, буде викликаний стимуляцією соматосенсорних нервів, а також іншими типами сенсорних подразників. Показано, що метод кенгуру змінює рівень CCK у плазмі крові у недоношених дітей (12), вказуючи, що це лікування стимулює активність блукаючого нерва і, можливо, як наслідок, анаболічний метаболізм у цих немовлят.

МЕТОДИ

Дослідні тварини. Сім вагітних щурів Sprague-Dawley були отримані від B & K Universal AB, Соллентуна, Швеція. Тварин одиночно утримували в клітках із контрольованою температурою (20 ± 1 ° C) та вологістю (45-55%) приміщеннями, освітленими з 0600 до 1800 год. Використовували гранульовану їжу із вмістом білка 18,5% (Лактамін, Вадстена, Швеція). Вода та їжа завжди були в наявності ad libitum. Щенята народилися через 1 тиждень після прибуття дамб до відділу тварин. Підстилка зменшилася до восьми дитинчат на щура через 7 днів після народження. Щенят відокремлювали від матері у віці 22 днів і утримували в клітках по чотири щури. Дослідження було схвалено Стокгольмським етичним комітетом з експериментів на тваринах.

Обробка зразків крові. Відразу після обезголовлення кров стовбура збирали в охолоджені пластикові пробірки, що містять 10 МО/мл гепарину (KABI Pharmacia AB, Стокгольм, Швеція) та 500 МО/мл апротиніну (Bayer AB, Стокгольм, Швеція). Зразки негайно центрифугували, плазму збирали і заморожували (-20 ° C).

Аналіз зразків крові. CCK. До RIA пептид відокремлювали від білків плазми за допомогою картриджів Sep-Pak C18 (Waters Associates, Milford, MA). Перед визначенням CCK зразки очищеної плазми розчиняли наполовину від початкового об'єму і таким чином концентрували два рази. Згодом це було виправлено. CCK проводили імунологічний аналіз, як описано Смедом та Увнесом-Мобергом (23). Були використані стандарт CCK (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA), антисироватка OAL-656 (Otsaka Assay Laboratories, Тукосіма, Японія) та 125 I-CCK (NEN DuPont, Boston, MA). Межа виявлення аналізу становила 3,6 пмоль/л. Коефіцієнти варіації внутрішньо- та міжаналітичного аналізу становили 10 та 12% відповідно.

Інсулін. Зразки плазми інкубували з антисироваткою M8309 (Науково-дослідний інститут Ново, Багсверд, Данія) протягом 48 год при 4 ° C. Потім додавали 125 I-інсуліну (NEN DuPont) і інкубацію продовжували протягом 4 годин при 4 ° C. Для підготовки стандартних кривих використовували синтетичний інсулін щурів (Ново-дослідний інститут). Стандартний інсулін, антисироватка та 125 I-інсуліну розводили в 0,02 М верональному буфері, рН 7,5, з 4% BSA. Межа виявлення становила 0,05 нг/мл. Коефіцієнти варіації між- та внутрішньоаналітичними дослідженнями становили 9,6% та 10,1% відповідно.

Глюкоза. Глюкозу аналізували методом GOD-PAP (Merckotest 3395, Merck, Дармштадт, Німеччина).

Ноцицептивні пороги. Ноцицептивні рефлекси оцінювали зануренням хвоста щура у воду з термостатичним контролем до 51-52 ° C. Було зафіксовано час затримки відведення хвоста. Було зареєстровано три послідовні значення, а середнє було використано для аналізу.

Статистичний аналіз. Результати представлені як середнє значення ± SD. Вплив окситоцину на масу тіла та збільшення маси тіла було перевірено двостороннім методом ANOVA з урахуванням віку, лікування та взаємодії віку та лікування як компонентів варіації. Якщо було виявлено суттєву різницю, a т тест використовували для оцінки, у якому віці існувала суттєва різниця між щурами, обробленими окситоцином та сольовим розчином. Відмінності в рівнях гормонів, жиру в організмі та ноцицептивних порогах між тваринами, які отримували окситоцин та сольовий розчин, були виявлені т тест. P значення 0,05 або менше розцінювались як статистично значущі.

РЕЗУЛЬТАТИ

Вага тіла та збільшення ваги. Самці щурів. Самці щурів, які отримували окситоцин, мали більш високу масу тіла на d 50 (експеримент I) та 60 (експерименти I та II) після народження (рис. 1A та 2A) та більший приріст ваги (рис. 1B та 2B), що було найбільш вираженим навколо 40-60 днів після народження, порівняно з контролем.