OJHAS 2016-1-5

Оригінальна стаття
Інтенсивність вільних радикальних процесів та рівні тестостерону та естрадіолу в насінній рідині чоловіків з різними типами патоспермії - персоніфікований підхід

Автори
Тетяна Шкурат, Професор, кафедра генетики, Південний федеральний університет, Ростов-на-Дону, Росія,
Ксенія Савікіна, Ембріолог, відділ ембріогенезу, Центр репродукції людини та ЕКО, Ростов-на-Дону, Російська Федерація,
Світлана Ломтева, Ембріолог, відділ ембріогенезу, Центр репродукції людини та ЕКО, Ростов-на-Дону, Російська Федерація,
Карина Сагамонова, Професор, Центр репродукції людини та ЕКО, Ростов-на-Дону, Російська Федерація,
Олександр Шестель, Андролог, Центр репродукції людини та ЕКО, Ростов-на-Дону, Російська Федерація,
Віктор Прокофєв, Науковий співробітник кафедри біомедицини Південного федерального університету, Ростов-на-Дону, Росія,
Тетяна Щерчкова, Старший науковий співробітник, кафедра генетики, Південний федеральний університет, Ростов-на-Дону, Росія,
Олена Шиманська, Старший науковий співробітник кафедри генетики Південного федерального університету, Ростов-на-Дону, Росія,
Катерина Дерев'янчук, Старший науковий співробітник, кафедра генетики, Південний федеральний університет, Ростов-на-Дону, Росія,
Анжела Александрова, Науковий співробітник кафедри біомедицини Південного федерального університету, Ростов-на-Дону, Росія.

Адреса для листування
Тетяна Шкурат,
Професор, кафедра генетики,
Південний федеральний університет,
Ростов-на-Дону, Росія,
194/1, проспект Стачки, Ростов-на-Дону, 344090, Російська Федерація.
Електронна пошта: [email protected]

Цитування
Шкурат Т, Савікіна К, Ломтева С, Сагамонова К, Шестель А, Прокофєв В, Шерчкова Т, Шиманська Е, Дерев'янчук Е, Александрова А. Інтенсивність вільних радикальних процесів та рівень тестостерону та естрадіолу в насіннєвій рідині чоловіків різних типів Патоспермії - персоналізований підхід. Інтернет J Health Allied Scs. 2016; 15 (1): 5. Доступно за URL-адресою: http://www.ojhas.org/issue57/2016-1-5.html

Подано: 28 березня 2016 р .; Прийнято: 29 квітня 2016 р .; Опубліковано: 30 травня 2016 р

Вступ:

Останні роки численні дослідження були присвячені вивченню окисного стресу, впливу активних форм кисню (АФК) та впливу антиоксидантів на репродуктивну систему чоловіків. (1-3) Помірні кількості АФК необхідні для фізіологічної регуляції функції сперми, гіперактивності та акросомної реакції. (4,5) У фізіологічних умовах сперма виробляє невелику кількість АФК, які необхідні для запліднення, ємності та акросомної реакції. Підвищена інтенсивність вільнорадикальних процесів розглядається деякими авторами як провідна екзогенна причина порушень процесів сперматогенезу. (6)

Молекулярний кисень є природним субстратом і метаболітом для аеробних форм життя, будучи основним джерелом енергії, і тому не має мутагенної активності в концентрації, що перевищує 20%, на відміну від його посередників - активних форм кисню. (7-10) Підвищена концентрація кисень і АФК здатні викликати мутації в сперматогоніях і сперматозоїдах. (11,12)

Було показано, що окислювальний стрес може зменшити рухливість сперми, а також запобігти проникненню сперми в ооцит. (13) Окислювальний стрес, спричинений підвищенням АФК або зниженням рівня антиоксидантів у насінній плазмі, відіграє важливу роль при порушенні параметрів сперми. (14) Також відомо, що більше 25% безплідних чоловіків мають підвищений рівень АФК у насінній рідині. (15)

Стандартні методи діагностики фертильності чоловіків, такі як дослідження параметрів еякуляту, що включає макроскопічні, мікроскопічні, біохімічні та функціональні показники, не завжди дозволяють судити про такі причини чоловічого безпліддя, як збільшення продукції АФК сперматозоїдами.

Метою даної роботи є порівняльний аналіз інтенсивності окисних процесів та рівня гормонів, що виробляються в насінній рідині в нормі та при патоспермії.

Матеріали та методи:

Ми вивчили 88 соматично здорових чоловіків у віці від 20 до 50 років, які звернулись до Центру репродукції та ЕКО у 2014 році з проблемою безпліддя у шлюбі та патоспермії в анамнезі. З цієї кількості були виключені пацієнти з азооспермією, генетичними захворюваннями, запальними процесами різної етіології, а також пацієнти з пар з недоведеним жіночим безпліддям. Контрольну групу складали 22 здорових чоловіки з нормозооспермією та з доведеною фертильністю.

Пацієнти були розділені на п'ять груп: 1) пацієнти з нормозооспермією (контрольна група); 2) з астенозооспермією (n = 28) олігозооспермією (n = 26), тератозооспермією (n = 20), олігоастенозооспермією (n = 14). Аналіз еякуляту проводили відповідно до рекомендацій ВООЗ. (16) Спермоплазму отримували центрифугуванням сперми при 2800 об/хв протягом 10 хв. Інтенсивність вільнорадикальних процесів та рівень тестостерону та естрадіолу визначали у спермоплазмі.

Для оцінки окисного стану плазми сперми ми використовували метод індукованої хемілюмінесценції (CL) в системі H2O2-люмінол (5-аміно-2,3-дигідро-1,4-фталазиндіон). Він відноситься до хімічних активаторів CL і реагує із вільними радикалами, утворюючи збуджені молекули. Люмінол, без несприятливого цитотоксичного ефекту та фотоефекту, забезпечує високий квантовий вихід під час процесу окислення та утворює широкий спектр активних форм кисню. (17) Дослідження проводились на автоматизованому хемілюмінесцентному аналізаторі Berthold Autolumat Plus LB 953 (Berthold Technologies, GmbH).

Рівні тестостерону та естрадіолу визначали за допомогою імуноферментного аналізу на автоматичному ІФА-аналізаторі «ALISEI QS» (Італія) в Центрі колективного використання «Високі технології» (Південний федеральний університет).

Статистичний аналіз: Статистичний аналіз проводили за допомогою програмного пакету Excel та Statistica v.6.0. Порівняння різних даних проводили за допомогою тесту Стьюдента і Пірсона (c 2). Відмінності вважалися значними на рівні 95% значущості (стор Результати і обговорення:

Відповідно до аналізу профілю сперми та на основі рекомендацій ВООЗ (16) ми сформували наступні групи:

1) Нормозооспермія (контроль) - профіль сперми відповідає нормативним значенням;

2) олігоастенозооспермія - концентрація сперматозоїдів була менше 15 млн/мл, рухливість A + B - менше 40%;

3) Астенозооспермія - концентрація сперматозоїдів була нормальною, рухливість сперми A + B була менше 40%, морфологія за суворими критеріями Крюгера - більше 4%;

4) олігозооспермія - концентрація сперматозоїдів була менше 15 млн/мл, рухливість A + B - більше 40%;

5) Тератозооспермія - концентрація сперми була нормальною, рухливість сперми A + B - більше 40%, морфологія за критеріями Крюгера - менше 4%.

У таблиці 1 наведені результати середньої концентрації, рухливості та морфології сперматозоїдів у досліджуваних групах. Було отримано, що групи суттєво відрізнялись за параметрами рухливості та кількості сперми. Збільшення кількості незрілих статевих клітин у групі з олігозооспермією свідчить про те, що дозрівання статевих клітин у цій групі мало незакінчений характер.

Таблиця 1: Показники концентрації, рухливості та морфології сперми у досліджуваних групах

Групи параметрів сперми

Концентрація, млн/мл

Мобільність (%)

Морфологія Крюгера (N)

Білі кров’яні клітини

Клітини сперматогенезу